PicoGreen升級版——Pico488:熒光法雙鏈DNA定量解決方案

前情回顧:核酸定量哪家強?熒光探針VS分光光度法

 

在許多生物學應用中,我們都需要對微量的雙鏈DNA(dsDNA)進行定量 例如:cDNA文庫構建、亞克隆的DNA片段的純化、定量DNA擴增產物在藥物分子種的殘留等。常規檢測核酸濃度的方法是吸光度法,即檢測核酸在260nm ( A260 )處的光吸收,吸光度法的弊端是樣本中的單鏈核苷酸和單體核苷酸會產生干擾信號,樣品中的雜質也會影響結果。吸光法無法區分DNA和RNA, 靈敏度也相對較低(用1cm的比色杯在A260值為0.1時相對應的雙鏈DNA濃度為5ug/ml )。

 

今天給大家帶來一款熒光法雙鏈DNA檢測工具—Pico488 dsDNA 定量試劑盒(貨號:B1102),以及單獨的Pico488 dsDNA 定量試劑(貨號:42010),Pico488是一種極為靈敏的熒光核酸染料,常用于雙鏈DNA的定量檢測。歷來DNA濃度的測定在cDNA文庫的構建,DNA亞克隆、PCR產物的估測等領域中具有重要意義,疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測更是直接關系到人類的健康。

 

Pico488僅在與DNA雙鏈結合后才發出熒光,且所產生的熒光與DNA濃度呈正比,在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下,可以選擇性地檢測低至pg級別的dsDNA。該分析在三個數量級范圍內呈線性,且幾乎無序列依賴性,可以精確地測量多個來源的DNA,包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴增產物,可用熒光分光光度計或熒光酶標儀讀數,Ex/Em=503nm/525nm。

 

Pico488 dsDNA 定量試劑盒
Pico488 dsDNA 定量試劑盒(貨號:B1102
Pico488 dsDNA定量試劑
Pico488 dsDNA定量試劑(貨號:42010

產品優勢:

相比傳統的方法,如紫外吸光法(A260)、探針雜交法、Hoechst?33258染料法等,Pico488?dsDNA?定量具有以下優勢:

①靈敏度高:數量級較UV吸光讀數更敏感,檢測范圍為:1pg/ul–5ng/ul,可節省寶貴的樣品;

②特異性強:在等摩爾的RNA存在的條件下,對dsDNA具有特異性;

③耐受性好:耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖,可以直接定量PCR擴增產物而無需從反應混合物中純化DNA;

④易于使用:只需在樣品中加入染料,等待5分鐘,然后讀數即可,且適用于24和96孔板;與市面上的大多數熒光酶標儀和熒光計兼容;

⑤適用范圍廣:可適用于PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領域。

 

產品應用:

測定微量的DNA殘留(如疫苗生產);對DNA樣品進行精確定量

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適用檢測設備及建議上樣量:

檢測設備類型 測定體積 Pico488染料工作液體積 DNA樣本量
比色皿熒光計 標準熒光比色皿 (3.5 mL) 2 ml 1 ml 1 ml
其他熒光比色皿 比色皿體積75% 比色皿體積的37.5% 比色皿體積的37.5%
平板熒光計 96 孔板*,每孔 0.2 ml 0.1 ml 0.1 ml
24 孔板,每孔 1 ml 0.5 ml 0.5 ml
其他規格的板子 孔體積的75% 孔體積的75% 孔體積的75%
NanoDrop™ 3300* 0.1 ml 0.05 ml 0.05 ml

* 為了保持測量的準確性和精度,我們建議避免移液體積小于2ul。

 

檢測結果展示:

Pico488光譜信息
Pico488光譜信息
Pico488染料特異性針對于dsDNA
Pico488染料特異性針對于dsDNA
試劑盒標準曲線
試劑盒標準曲線

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引用文獻賞析

1.Caza, F.; Granger Joly de Boissel, P.; Villemur, R.; Betoulle, S.; St-Pierre, Y. Liquid biopsies for omics-based analysis in sentinel mussels.?PLoS One,?2019, 14(10), e0223525. doi: 10.1371/journal.pone.0223525

2。Crupi, A.N.; Nunnelee, J.S.; Taylor, D.J.; Thomas, A.; Vit, J.-P.; Riera, C.E.; Gottlieb, R.A.; Goodridge, H.S. Oxidative muscles have better mitochondrial homeostasis than glycolytic muscles throughout life and maintain mitochondrial function during aging.?Aging,?2018, 10(11), 3327–3352. doi:?10.18632/aging.101643

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文章來源:熒光法雙鏈DNA定量工具—Pico488(PicoGreen升級版)

 

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