用于熒光細胞膜顯微鏡的鰭狀肢-TR 試劑盒,Cytoskeleton解決方案

Flipper TR是一種熒光探針,專門針對細胞質膜,并通過其熒光壽命變化報告膜張力變化。它是Flipper探針家族中最先進的成員,2,3),通過機械載體的兩個扭曲的二噻吩噻吩之間的扭曲角和極化的變化來感知脂質雙層膜組織的變化。Flipper TR會自發地插入細胞的質膜中,當插入脂質膜時,它只會發出熒光。它具有廣泛的吸收和發射光譜,通??梢杂?88nm激光激發,而發射在575和625nm之間。Flipper TR可用于多種生物,包括細菌、酵母、哺乳動物和植物。

用于熒光細胞膜顯微鏡的鰭狀肢-TR 試劑盒

作為Cytoskeleton全國總代理,艾美捷科技強烈推薦Cytoskeleton熱銷產品熒光細胞膜顯微鏡的鰭狀肢-TR 試劑盒。產品僅用于科研,不可用于臨床診斷。

 

Cytoskeleton公司目前主要的產品有340余種,其產品主要覆蓋肌動蛋白,微管蛋白,馬達蛋白,小G蛋白,細胞外基質,活細胞成像等相關領域,提供對應的蛋白質,抗體,檢測與分析試劑盒,并且產品線還在不斷的擴大中。

產品名稱 貨號 詳情
熒光細胞膜顯微鏡的鰭狀肢-TR 試劑盒 CY-SC020 查看

 

儲存:

收到探頭后,將其儲存在-20°C。使用新的無水DMSO制備探針溶液(因為舊的和濕的DMSO會大大縮短探針的保質期)。使用后將探頭溶液儲存在-20°C。打開小瓶前,應將其加熱至室溫。妥善儲存后,溶液中的探針應穩定3個月。注意:處理DMSO溶液時應特別小心,因為DMSO有助于有機分子進入組織。按照所有相關的當地法規處理這些試劑。

注:該方案使用粘附在蓋玻片上的HeLa細胞進行了優化,并已在其他常見細胞系中得到證實。應將實驗方案的建議作為起點,并根據經驗確定每種細胞類型的最佳標記條件。

 

制備1mM儲備溶液

將Flipper TR小瓶的內容物溶解在50μL無水DMSO中,制成1mM儲備溶液。該溶液應儲存在-20°C或更低的溫度下。不要將溶液分成小份,它們會更快地腐爛,并且化合物不會被多次凍融循環改變。如果儲存得當,該儲備溶液應穩定三個月。(可選)如果需要準確測定儲備溶液的濃度,稀釋1?l 1mM儲備溶液,99?l二甲基亞砜。在425 nm處測量吸光度。使用上述消光系數計算濃度。

 

準備染色溶液

將Flipper TR稀釋至所需濃度(從1開始?M) 在應用于細胞之前不久在細胞培養基中(使用前不要將染色溶液保持超過2小時)。注:當使用含有胎牛血清(FCS)或其他血清的細胞培養基時,與沒有血清的培養基相比,標記效率可能會降低。像往常一樣,在蓋玻片、玻璃底皿或玻璃底多孔板上培養細胞。當細胞達到所需密度時,用染色溶液替換培養基,確保所有細胞都被溶液覆蓋。成像前,將細胞置于37°C、含5%CO2的濕潤環境中的培養箱中15分鐘。30分鐘或更長時間后,由于膜翻轉,可以看到內體結構的標記。

 

然而,含有細胞器(內質網、高爾基體)的細胞是有限的。內體結構通常具有較低的壽命。任選地,可以去除含有探針的培養基,并在新鮮培養基中洗滌細胞一次。由于探針僅在膜中是熒光的,因此不需要移除探針,特別是在計劃長期成像(>24h)時培養基含有血清的情況下。

 

使用485或488nm脈沖激光通過600/50nm帶通濾波器激發和收集光子,用標準FLIM顯微鏡對細胞成像。我們建議優化標記程序以及圖像采集設置,以最小化488nm激發光在活體樣品上引起的光損傷。為了提取壽命信息,將ROI或單個像素的光子直方圖(累積足夠的計數以確保良好的統計)與雙指數和兩個衰減時間進行擬合,?1和?2被提取。具有更高擬合振幅的最長壽命?1用于報告膜張力,在2.8和7.0納秒之間變化。更長的壽命意味著膜中的張力更大。?2具有較小的值(在0.5和2ns之間)和較小的擬合振幅不太適合研究膜張力。使用參考文獻1中給出的校準程序,可以將壽命與絕對膜張力相關。

 

使用熒光細胞膜顯微鏡的鰭狀肢-TR 試劑盒重要注意事項:

-膜張力測量只能通過FLIM顯微鏡進行,熒光強度或波長不能可靠地報告膜張力。

-脂質組成隨時間變化的系統也可能導致Flipper TR壽命的變化。

-FLIM成像是一種先進的顯微鏡技術,需要商業化或定制的FLIM顯微鏡系統,具有足夠的激發激光器、光子計數系統和發射濾波器。建議客戶咨詢儀器負責人或聯系顯微鏡制造商,以確保其系統能夠對Flipper TR熒光和壽命進行成像。

 

相關文獻:

1)Colom A, et al: A fluorescent membrane tension probe. Nat Chem, 2018, 10:1118–1125.

2)Dal Molin M, et al: Fluorescent flippers for mechanosensitive membrane probes. JACS, 2015, 137:568-571.

3)Soleimanpour S, et al: Headgroup engineering in mechanosensitive membrane probes. Chem Commun (Camb) 2016,52:14450-14453.

 

Cytoskeleton專注于生物化學和細胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發與生產。公司提供藥物篩選、信號轉導、蛋白質轉錄后修飾(PTM)、細胞骨架研究相關的系列試劑盒和產品,尤其以細胞骨架相關研究見長,既能滿足于樣品較少的科學研究,也可以用于小規模篩選研究和高通量大規模篩選研究。此外,公司還提供微管蛋白,肌動蛋白,小G蛋白,GAPs,GEFs等現有產品的藥物篩選服務。

 

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